胰島素ELISA試劑盒的操作流程

發(fā)布時間： 2023-05-11　　點擊次數(shù)： 1456次

　　胰島素ELISA試劑盒是一種常見的生物化學(xué)實驗工具，用于檢測血液中的胰島素含量。它作為一種常用的生物化學(xué)實驗工具，具有操作簡便、準(zhǔn)確性高、靈敏度強等優(yōu)點，在糖尿病等相關(guān)疾病的診斷和治療中發(fā)揮著重要的作用。

　　一、原理

　　ELISA(Enzyme-linked immunosorbent assay)試劑盒是基于酶標(biāo)記技術(shù)和免疫學(xué)原理的試劑盒。在胰島素ELISA試劑盒中，首先將包含特異性抗體的固相載體放在微孔板上，然后加入待測標(biāo)本和酶標(biāo)記的二抗，隨后進行洗滌步驟，最后加入底物，觀察反應(yīng)產(chǎn)物的信號強度，并根據(jù)參比標(biāo)準(zhǔn)曲線計算出待測樣品中的胰島素含量。

　　二、操作流程

　　1、樣品處理：將待測血清離心去除懸浮物，得到清澈的上清液。

　　2、準(zhǔn)備試劑：將試劑盒內(nèi)所需試劑取出并恢復(fù)至室溫。

　　3、樣品加標(biāo)：將待測標(biāo)本和標(biāo)準(zhǔn)品依次加入微孔板中，每個孔添加適量的樣品，注意對照孔要做好空白對照。

　　4、孵育：將微孔板加蓋并在恒溫水浴中孵育，使抗體與樣品中的胰島素結(jié)合。

　　5、洗滌：用洗滌緩沖液反復(fù)洗滌微孔板，去除未結(jié)合的物質(zhì)。

　　6、添加酶標(biāo)記的二抗：將酶標(biāo)記的二抗加入每個孔中，孵育一段時間后再次洗滌。

　　7、添加底物：向每個孔中添加底物，使其和酶標(biāo)記形成顯色產(chǎn)物。

　　8、終止反應(yīng)：在適當(dāng)?shù)臅r間內(nèi)，加入終止劑停止顯色反應(yīng)。

　　9、測量吸光度：利用酶標(biāo)儀檢測孔內(nèi)顯色產(chǎn)物的吸光度。

　　三、應(yīng)用

　　胰島素ELISA試劑盒廣泛用于臨床醫(yī)學(xué)中對糖尿病患者血液中胰島素含量進行定量檢測，也可用于研究中對胰島素和胰島素類似物的測定。此外，ELISA技術(shù)還可以應(yīng)用于藥物篩選、蛋白質(zhì)相互作用研究等領(lǐng)域。