新生牛血清(NewbornCalfSerum,簡稱NBCS)是通過采集出生0-7天或0-30天內(nèi)的新生牛靜脈血,經(jīng)除菌過濾后制成的用于動物細胞實驗的生物試劑。其質(zhì)量好壞直接影響細胞的生長情況,因此判斷牛血清的性能至關重要。
總蛋白含量
定義:總蛋白是牛血清中的重要成分,在細胞培養(yǎng)中起著維持滲透壓、pH值緩沖、物質(zhì)運輸和提供營養(yǎng)等作用。
檢測方法:通過化學成分分析,測定血清中的總蛋白含量。一般來說,國產(chǎn)牛血清的總蛋白含量在3.7%到4.4%之間。
評估標準:總蛋白含量適中且穩(wěn)定,表明血清質(zhì)量好。如果總蛋白含量過高或過低,可能意味著血清摻假或處理不當。
血紅蛋白含量
定義:血紅蛋白是評價牛血清生產(chǎn)工藝好壞的重要指標。在采血、運輸和儲存過程中,紅細胞可能會裂解釋放出血紅蛋白。
檢測方法:通常采用分光光度法來測定血紅蛋白含量。
評估標準:優(yōu)質(zhì)的新生牛血清中血紅蛋白含量應盡可能低。《中國藥典》三部(2015版)要求血紅蛋白含量不高于200mg/L。血紅蛋白含量高可能導致細胞受損和下游純化難度增加。
內(nèi)毒素含量
定義:內(nèi)毒素是由革蘭氏陰性菌細胞壁裂解釋放的毒素,不利于細胞生長。
檢測方法:通過定量檢測內(nèi)毒素含量,通常以EU/ml為單位。
評估標準:內(nèi)毒素含量≤10EU/ml為特級,內(nèi)毒素含量>10EU/ml且≤25EU/ml為優(yōu)級,內(nèi)毒素含量≥25EU/ml為標準級。內(nèi)毒素含量越低,對細胞生長越有利。
外觀
顏色:根據(jù)血紅蛋白含量的不同,胎牛血清可表現(xiàn)出黃色或紅色。優(yōu)質(zhì)進口血清呈現(xiàn)淡黃或微紅色,而劣質(zhì)血清可能呈現(xiàn)橘紅色或鮮紅色。熱滅活或保存不當?shù)难鍟尸F(xiàn)暗紅甚至咖啡色。
澄清度:進口血清由于蛋白和脂類含量低,表現(xiàn)為稀薄、清淡;國產(chǎn)血清相對粘稠,顏色略深。
沉淀
觀察:進口血清在過濾分裝前很少反復凍融,成品清澈。但隨著時間推移,血清中的纖維蛋白會析出形成沉淀。
評估:優(yōu)質(zhì)血清在生產(chǎn)后初期應清澈無沉淀,長時間存放后可能會有少量沉淀。
免疫球蛋白含量
定義:免疫球蛋白的含量可以反映采血時牛齡情況。胎牛血清不含IgM,IgG含量也較低。
檢測方法:通過免疫學方法測定IgG和IgM的含量。
評估標準:IgG含量遠低于標準值,表明采血時牛齡較小,血清質(zhì)量較好。
微生物和病毒含量
定義:微生物包括細菌、霉菌、支原體、噬菌體及各類病原性病毒,這些微生物會影響血清質(zhì)量。
檢測方法:通過細胞培養(yǎng)實驗和多種病毒檢測來評估。
評估標準:出廠前經(jīng)過嚴格檢測,確保無致病變、無血吸附、多種病毒檢測陰性。
批間差
定義:不同批次血清中的微妙成分差異可能導致細胞適應期延長,影響實驗結果。
評估標準:通過嚴格的質(zhì)量控制篩選和驗證標準,減少批間差異。