1.抗原或抗體的選擇與準備：需要選擇具有高特異性和親和力的抗原或抗體作為檢測目標。這些生物分子通常來源于病原體、細胞或組織，并通過生物技術(shù)手段進行提取和純化。
2.包被過程：將選定的抗原或抗體均勻地涂覆在微孔板（通常是聚苯乙烯材質(zhì)）的表面。這一步驟通常采用吸附或共價結(jié)合的方式，確?？乖蚩贵w能夠牢固地附著在微孔板上。包被后，需要對微孔板進行充分的洗滌，以去除未結(jié)合的抗原或抗體。
3.封閉非特異性位點：在包被抗原之后，為了減少后續(xù)實驗中的非特異性吸附，需要在微孔板中加入封閉液（如牛血清蛋白、雞蛋白等）。這些封閉劑會占據(jù)微孔板上未被抗原或抗體占據(jù)的位點，從而降低假陽性反應的風險。
4.標準曲線制備：根據(jù)需求，將一系列已知濃度的標準物質(zhì)（通常是純化的抗原）制備成不同濃度的標準溶液。這些標準溶液用于后續(xù)的定量分析及計算。
5.樣品處理與一抗結(jié)合：將待測樣品經(jīng)過適當?shù)那疤幚砗?，加入到已?jīng)包被有抗原的微孔板中。樣品中的目標物（抗原或抗體）會與微孔板上的抗原或抗體發(fā)生特異性結(jié)合。隨后，加入與待測目標物相應的一抗（通常是標記有酶或熒光染料的抗體），使其與樣品中的目標物發(fā)生特異性結(jié)合。
6.二抗結(jié)合與底物添加：加入與一抗相對應的二抗（通常是與酶結(jié)合的抗動物抗體），使其與一抗結(jié)合。這二抗可以與一抗形成復合物，進一步增強目標物的信號。然后，加入適當?shù)牡孜?，通過酶的催化作用產(chǎn)生可檢測的信號（如顏色變化、熒光發(fā)射等）。
7.反應停止與測量：在信號的發(fā)展達到所需程度后，加入合適的反應停止劑，停止酶反應，并防止繼續(xù)信號的擴大。最后，使用相應的測量儀器（如酶標儀、熒光分析儀等）來測量反應產(chǎn)生的信號，并根據(jù)已知標準曲線計算出樣品中目標物的濃度或相對含量。
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