人葉酸受體ELISA檢測試劑盒標(biāo)本要求有哪些呢
人葉酸受體ELISA檢測試劑盒對體外培養(yǎng)的人血清、血漿、細胞裂解液、細胞培養(yǎng)上清和卵泡液中的folr1進行定量分析。預(yù)包被抗體為folr1多克隆抗體。檢測相抗體為folr1多克隆抗體,生物素標(biāo)記。
將樣品和生物素標(biāo)記抗體依次加入平板孔中,用PBS或TBS洗滌。加入過氧化物酶標(biāo)記的親和素反應(yīng),用PBS或TBS洗滌后,用底物TMB顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化為藍色,在酸的作用下轉(zhuǎn)化為黃色。顏色與folr1呈正相關(guān)。
Folr1,也稱為fol受體α。成熟folr1是一種固定在細胞表面的N-糖基化蛋白。Folr1主要存在于上皮細胞中,可溶性Folr1可從細胞表面脫落進入血液和乳汁。
人葉酸受體ELISA檢測試劑盒標(biāo)本要求如下:
1、血清:將收集于血清分離管的全血標(biāo)本在室溫放置2小時或4℃過夜,然后1000×g離心20分鐘,取上清即可,或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
2、血漿:用EDTA或肝素作為抗凝劑采集標(biāo)本,并將標(biāo)本在采集后的30分鐘內(nèi)于2-8℃1000×g離心15分鐘,取上清即可檢測,或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
3、組織勻漿:用預(yù)冷的PBS(0.01M,pH=7.4)沖洗組織,除去殘留的血液(勻漿中溶解的紅細胞會影響測量結(jié)果),稱重后切成塊。PBS的體積為1:9,例如,1g組織樣品相當(dāng)于9mlPBS。具體體積可根據(jù)實驗需要調(diào)整并記錄。建議在PBS中加入蛋白酶抑值劑(PPI),加入玻璃均質(zhì)機中,在冰上研磨。為了進一步溶解組織細胞,可以用超聲波破碎或反復(fù)凍融。取勻漿5000×g離心5~10min,檢測上清液。
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